Schizophyllum Komünü ile Olmak: Bulunan Mantarlardan Steril Bir Kültür Yaratmak: 3 Adım (Resimlerle)

2024 Yazar: John Day | [email protected]. Son düzenleme: 2024-01-30 13:21

Bu talimat, bulunan mantarları kullanarak bir petri kabında mantar Schizophyllum Commune'nin (genel adı Split Gill mantarı) steril bir kültürünün nasıl oluşturulacağını açıklamaya odaklanmıştır. Schizophyllum Komünü'nün 28.000'den fazla cinsiyete sahip olduğu, Antarktika hariç tüm kıtalarda bulunabildiği ve (diğer "beyaz ve kahverengi çürük mantarlar" gibi) endokrin bozucu kirliliği (plastikler, gübre Atrazine, plastikleştirici Bisfenol-A veya sentetik hormon Dietilstilbestrol).

Yabani mantar tanımlama tekniklerini, besleyici bir agar petri kabının nasıl yapılacağını ve petri kabınızda steril izole bir kültür yetiştirmek için bulunan mantarlarınızı nasıl kullanacağınızı ele alacağım. Bu serideki diğer talimatlar, mantarların genetik olarak tanımlanması, mantarın plastikleri parçalama kabiliyetini test etmek için basit enzimatik testler ve kirliliği taklit eden hormonlar ve S. Commune ile nasıl peynir yapılacağı gibi tekniklerin üzerinden geçmektedir.

Bu proje, Eylül 2018 sonbaharında Barselona İspanya'daki HANGAR'da ikamet ederken Mary Maggic, Paula Pin ve benim ortak çalışmasından çıktı. Proje hakkında daha fazla bilgi için ~~ bölümünü okuyun veya tüm Bla Bla'yı atlayın ve doğrudan Step'e gidin. 1 ders için:)

Görüntüler Schizophyllum Commune Fanzine'den alınmıştır ~ dosyalar buradan ücretsiz olarak indirilebilir

Rezidans süresince üç ana hedefimiz şunlardı:

1 ~ Schizophyllum Komünü ve hormonlar ve endokrin bozucu petrokimyasal kirleticiler ile çeşitli etkileşimleri hakkındaki bilimsel literatürü araştırın ve sindirin. S. Commune, hormonal ve endokrin bozucu kirliliği parçalama yeteneğine sahip birçok "beyaz ve kahverengi çürük" mantardan biridir. Bu mantarlar, ağ yapılı gövdelerinden veya "misellerden" "lignoselülozik" enzimler salgılayarak ağaçlardan beslenirler ve enzimler ağaçların yapıldığı selüloz ve lignini parçalayabilirler. Atrazin, BPA, Estradiol, Dietilstilbestrol ve Nonilfenoller gibi selüloz, lignin ve EDS' / Hormonlar arasındaki yapısal benzerlikler nedeniyle, mantarlar tarafından salgılanan "lignoselülozik" enzimler de çok çeşitli toksik maddeleri parçalayabilir. Buna ek olarak, S. Commune, kanser önleyiciler ve tedaviler olarak yardımcı olan (Japonya'da rahim ağzı kanserlerinin tedavisi için onaylanmıştır), fermentasyon yoluyla bazı bitkilerin fitoöstrojenik özelliklerini geliştirebilen, rennet ve laktobasilius yerine kullanılabilen immün sistemi uyarıcı polisakkaritler üretir. peynir yapımı süreçleri ve trombin pıhtı çözücü enzimler üretir (tromboz tedavisinde yararlıdır). Garip bir şekilde, kanser tedavileri ve bağışıklık uyarıcıları olarak kaynar su ile ekstrakte edilebilen bu aynı "beta-glukanlar", petrol endüstrisi tarafından yağ verimini arttırmak için kullanılır ve S. Commune'u endokrin bozucu üretimine tuhaf bir geri besleme döngüsüne bağlar. petrokimyaları bozabilir ve iyileştirebilir.

2 ~ Kodlanmış bilimsel bilgiyi daha erişilebilir bir dile çevirmek için DVE'ler ve mantarlarla çalışmak için bu tarifleri basitleştiren Kendin Yap ve DIWO (başkalarıyla yap) protokolleri geliştirin. Bu tarifleri eğitim için, sorgulama için, moleküler kolonizasyonlara karşı direnç için ve çok türlü oluşumlar ve kolektif mutajenezimiz hakkında yeni anlatılar yaratmak için kullanın.

3 ~ Endokrin bozucu kimyasalları (EDC'ler) çevreleyen baskın cisheteronormatif, queerfobik söyleme meydan okuyun. Malin Ah-King ve Eva Hayward'ın bu konudaki araştırmalarından alıntı yapacak olursak, "Birçok haber kuruluşu arka bahçelerimizden bu ürkütücü endokrin hikayelerini bildiriyor. Bu konuları ön plana çıkarmak için -aşağıda anlatacağımız gibi- medya bir Frankenstein metamorfozunun ışığını yaktı. Bu, cinselliği ve cinselliği tehdit eder. Toksik maruziyetle ilişkili diğer birçok sağlık riskini ele almak yerine, en sansasyonel ve tartışmalı konular tartışma ve eleştirel yanıt için duruyor. Soruları gündeme getiriyor: Seks neden kanserden, oto-bağışıklık hastalığından daha merkezidir? ve hatta ölüm? Hangi kültürel sinirler (çoğu küreselleşmiştir) tetiklenir? Ve feminist kaygıları olan bizler için, tartışmayı özcülükten, cinsiyetçilikten ve heteronormativiteden nasıl uzaklaştırabiliriz?" (Zehirli Cinsiyetler).

Schizophyllum Commune, 28.000'den fazla genetik cinsiyete sahip olduğu tespit edilen benzersiz bir "beyaz çürüklük mantarıdır". Birçoğunun teoriye göre bu adaptasyon, Antarktika hariç dünyanın her kıtasında var olan bu türün inanılmaz genetik çeşitliliğini mümkün kıldı. Biyolojinin tuhaflığının bir örneği olarak bu organizmanın güzel cinsel çeşitliliğini kutlamak istedik. Medyada ve hatta çevre aktivistlerinde DVE'leri çevreleyen baskın söylem, bu moleküllerin toplumumuzun patolojikleştirdiği, normatif olmayan olarak nitelendirdiği ve çoğu zaman ortadan kaldırmaya veya kaçınmaya çalıştığı belirli cinselliklere veya cinsiyetlere neden olduğuna dair bilimsel olmayan anlatılara ağırlıklı olarak odaklanmaktadır. EDC'nin bilimsel olarak gerçekçi olmadığı (hormonlar ve endokrin bozucular insanları queer veya trans yapmazlar) hakkındaki toplumsal haykırışların seks panikli, queer fobik odak noktası olmakla kalmaz, aynı zamanda EDC'lere bağlayabileceğimiz yıkıcı derecede gerçek etkilerin hepsini görmezden gelir: obezite, diğer sağlık risklerinin yanı sıra tiroid bozuklukları, bazı kanserler.

Adım 1: Topluluğunuzda Yaşayan Schizophyllum Komünü'nü Bulun

Schizophyllum Commune'ün laboratuvar sınıfı steril kültürleri ATCC gibi bir mikrobiyolojik kültür bankasından yaklaşık 350 $'a satın alınabilir… bu yüzden yabani mantarlardan ücretsiz kültür yapmayı seçtik:)

Kolaydı çünkü Schizophyllum Komünü hakkında bir şeyler okuyordum ve bir gün apartmanımın önündeki bir ağaçta büyüdüğünü fark ettim. Mahallenizde kazara S. Commune'a rastlayacak kadar şanslı değilseniz, hastalıklı sert ağaçlarda (yapmıyormuş gibi görünen ağaçlar) yetişen "köşeli" mantarları aramak için ormanlık bir alana gitmek isteyeceksiniz. çok iyi) veya düşmüş ağaçlar. S. Commune, dünyadaki en yaygın mantarlardan biridir ve temel olarak üzerinde yetişecek sert ağaçların olduğu her yerde bulunabilir.

Mushroomobserver.org, S. Commune'u nerede ve ne zaman bulabileceğinizin yanı sıra onu nasıl tanımlayacağınız ve yanlış tanımlamaya yol açabilecek "benzerler"den nasıl kaçınacağınız konusunda çok ayrıntılı bir açıklama sağlar:

TANIMLAMA: Schizophyllum commune, ayrık solungaçları, yoğun tüyleri ve yelpaze şeklindeki kapağı ile kolayca tanımlanır. Başlık 1-4.5 cm genişliğindedir ve genellikle gri ila beyazımsı bir yüzeye sahip bir kabuk veya yelpaze şeklindedir. Basidiosporlar 5-7.5 × 2'dir. -3 mikrometre “Crimped Gill” olarak bilinen benzer bir mantar olan Picaturopsiscrisca çok yaygın değildir.

HABITAT: Schizophyllum commune, lignini parçalamak için enzimler kullanarak sert ağaçta büyür ve "beyaz çürümeye" neden olur. Bu yüzden çoğu ağaçlık alanda bulunur. Kurutma, daha iyi koşullarda rehidrate etme ve daha sonra sporlaşmaya devam etme yeteneği nedeniyle yıl boyunca bulunabilir.

Bu mantar, kuraklık gibi diğer faktörlerin stresi altında olan küçük çaplı ağaçlarda parazit olabilir.

BENZER GÖRÜNÜMLER: Plikaturopsis crispa veya “Kıvrımlı Solungaç”, Bölünmüş Solungaç'a benzer. Ayrıca kabuk/fan şeklinde meyve veren bir gövdeye sahiptir. Ancak kapak kırmızımsı kahverengi veya sarı kahverengidir ve alt tarafı çok belirgindir. Schizophyllum komününün bölünmüş solungaçlarından çok farklı olan kıvrımlı damar benzeri solungaçlara sahiptir. Kıvrımlı Solungaç daha az yaygındır ancak bulunduğunda ayırt edicidir."

Adım 2: S. Commune'un Büyümesi için Besin Agar Plakaları Yapın

Bulduğunuz S. Commune kültürünü izole etmek için mantar için yiyecekle dolu petri kaplarına ihtiyacınız olacak. Malt özü Agar, S. Commune için basit bir yiyecek veya kolayca erişilebilir malzemelerle hazırlanabilen "besin ortamı"dır. Ayrıca S. Commune ve diğer beyaz veya kahverengi çürüklük mantarları ile enzimatik deney deneyleri yaparken kullanmak için iyi bir besin kaynağıdır ~~ bu işlem başka bir talimatta ele alınacaktır.

YAN NOT: S. Commune'u bulmakta sorun yaşıyorsanız, aynı ailede aynı işlemler kullanılarak kültürlenebilen ve endokrin bozucu kirleticileri parçalamada daha iyi olmasa da aynı derecede iyi olan birçok başka mantar vardır. Hindi Kuyruğu (Trametes Versicolor), yüzlerce beyaz ve kahverengi çürüklük mantarına bakan birçok çalışmada, petrokimyasal kirliliği bozan "lignoselülozik" enzimlerin en yüksek üreticileri olarak bulunmuştur. İstiridye mantarı da bu konuda çok iyidir.

Mikrobiyolojik çalışmamı cam eşyalara, dijital terazilere, dereceli silindirlere, otoklavlara (medyanın ısı ve basınç sterilizasyonu için) vb. erişebildiğim BUGSS (Baltimore Underground Science Space) adlı bir topluluk biyoloji laboratuvarında yapıyorum. son on yılda dünya çapında yayıldı, bu yüzden yakınınızda bir tane olup olmadığını görmek için bu listeyi kontrol etmek isteyebilirsiniz. Bölgenizde bunun gibi harika bir topluluk laboratuvarınız yoksa, bu işlem için aşağıdakiler gibi bazı temel ekipmanlara yatırım yapmanız gerekir:

1 ~ Malzemelerinizi hassas bir şekilde ölçmek için dijital bir ölçek

2 ~ Medyanızı ısı ve buharla sterilize etmek için bir düdüklü tencere

3 ~ Petri kapları, internetten oldukça ucuza satın alınabilir, yeniden kullanılabilir cam veya tek kullanımlık plastik işe yarar ama yeniden kullanılabilir her zaman daha iyidir:)

4 ~ Malzemelerinizi karıştırmak, sterilize etmek ve saklamak için bazı cam eşyalar.

Bu ekipmana yatırım yapmak istemiyorsanız, Amazon gibi web sitelerinde satın almak için önceden dökülmüş malt özü agar plakaları bulabilirsiniz ~ mikrobiyolojik çalışmaya devam etmeyi planlıyorsanız, uzun vadede sadece daha pahalı olacaktır.

Evde kendi besleyici medya petri kaplarınızı nasıl yapacağınıza dair birçok harika rehber ve youtube videosu var. Bu konuda çok fazla ayrıntıya girmek yerine, sadece bir çiftle bağlantı kuracağım ve kullanacağınız besin ortamı olan %2 Malt Extract Agar'ın tarifini vereceğim.

Freshcap Musrooms: Evde Büyüyen Mantarlar için Agar Plakalarının Nasıl Yapılacağına İlişkin Kılavuz

Mykoweb: Mantar Yetiştiriciliğine Başlarken

Malt Extract Agar Teknik Bilgi Formu

%2 Malt Extract Agar (MEA) ~~ 1 Litrelik Tarif:

20g Malt Özü (ortak bira yapım kaynağı, çevrimiçi olarak satın alınabilir)

15g Agar (katılaştırıcı madde - bu, çevrimiçi olarak veya bazı marketlerden satın alınabilmesi için sık sık pişirmek için kullanılır)

1 Litre H20 (Genellikle çoğu marketten galon testilerde satın alınabilen Reverse Osmosis suyu kullanıyorum)

Daha küçük miktarlarda yapmak istiyorsanız bu tarif kolayca değiştirilebilir. Örneğin bir seferde sadece 250 mL yapıyorum, bu yüzden sadece 5 gram Malt Özü, 3.75 gram Agar ve 250 mL su kullanıyorum.

Adım 3: Petri Kabınızı Mantarlarla Aşılayın

Gördüğünüz mantar "meyve veren vücut" olarak adlandırılır, organizmanın sadece küçük bir parçasıdır. Vücudunun büyük bir kısmı ağaçta (veya yerde) gizlenerek odunu tüketir. Mantarın bu kısmına miselyum denir. Schizophyllum Commune'nin beyaz ipliksi, dokunaçlı, rizomatik, misel gövdesini bir petri kabına kültürlemek için, gövdeden bir örnek alacak, sterilize edecek ve MEA plakalarınıza yerleştireceksiniz. Miselyum, sterilize edilmiş mantar gövdesi çekirdek örneğinden büyüyecek ve beyaz pamuklu bir hasır gibi görünen petri kabını kolonize edecektir.

İhtiyacın olacak:

• Bir önceki adımda hazırladığınız Malt Extract Agar (MEA) plakaları
• %70 İzopropil alkol (sürtünme alkolü) ve bir sprey şişesi
• Kağıt havlu
• Neşter veya sadece paslanmaz çelik bir ustura -- kutu kesici işe yarayacaktır
• metal cımbız
• eldivenler
• Alev -- Aletlerin sterilizasyonu için bir alkol lambası kullanıyorum, NonDisjunction burada nasıl yapılacağına dair harika bir öğreticiye sahip.
• Kesilecek steril yüzey (Bunun için sadece steril bir petri kabı kullandım)
• Parafilm, petri kaplarını mühürlemek için kullanılan bir parafin film -- yoksa sadece maskeleme bandı da kullanabilirsiniz.

STERİL TEKNİK:

Steril tekniği kullanmaya çalışırken aklınızda bulundurmanız gereken en önemli şey, bakteri ve sporların sürekli olarak havada düşmesidir, bu nedenle petri kaplarınızı mümkün olduğunca kapalı tutmak istersiniz. Medyayı dökmek veya aşılamak için kapakları kaldırdığınızda, kapağı kabın hemen üzerinde tutarak içeriye yatay olarak erişmenizi sağlamak, ancak bakterilerin içeri girmesini önlemek için kapağı kabın üzerinde tutmak her zaman en iyisidir. insan, bakteri, mantar ve diğer organizmalardan oluşan dev bir topluluktur ~~ göremeseniz de, vücudunuzdan yayılan yoğun bir mikrop bulutu ile çevrilisiniz. Sadece cildinizin yüzeyinde oturmak yerine, mikro-biyomunuz havaya uzanır ~~ oooooo, ellerinizi asla petri kabının üzerinde sallamayın veya içeriye bakmak için açık kabın üzerine eğilmeyin. Ve eğer varsa eldiven giyin. sen onlara sahipsin;)

YARI STERİL ÇALIŞMA ALANINIZI KURUN

Kalıntı ve hurdalardan arındırılmış gözeneksiz bir çalışma yüzeyi seçin. Bölgeye %70 İzopropil Alkol solüsyonunuzu püskürtün ve bir kağıt havluyla silin. Alevinizi çalışma alanınızın ortasına yerleştirin ve yakın. Alev etrafında küçük bir steril alan oluşturduğu için aleve mümkün olduğunca yakın çalışmak isteyeceksiniz. MEA plakalarınızı bir tarafa ve mantar numunenizi diğer tarafa steril bir kesme yüzeyine yerleştirin. Normalde steril kesme yüzeyim ve alet desteği olarak steril bir petri kabı kullanırım. Küçük bir bardağa biraz İzopropil Alkol dökün - bunu çalışırken bıçağınızı ve cımbızınızı sterilize etmek için kullanacaksınız.

*¡~ AŞILAYIN ~!*

Herhangi bir şey yapmadan önce, bıçağınızı ve cımbızınızı izopropil alch'e batırarak ve ardından alevin üzerinde biraz tutarak sterilize edin. Sterilizasyondan sonra, eğer varsa, steril kesme yüzeyinize koyun. Cımbız kullanarak mantar sapını sabit tutun ve ucundan bir parça kesin. Bu parçayı alın ve tüm kenarlarını kesin, böylece tüm dış yüzeyleri çıkarılmış küçük bir mantar sapı çekirdeği küpü elde edin. Bu, mantarda yaşayan diğer tüm mikroplardan kurtulmanıza yardımcı olur, böylece kültürünüzü kirletmezler. Ardından gövde çekirdeğini yaklaşık 30 saniye izopropile batırın, dışarı çekin ve alevin steril alanında kurumasını bekleyin (kurutmak için alevi kullanmayın, bu mantarı öldürür). Gövde çekirdeğinin kurumasını beklerken cımbızınızı tekrar alevle sterilize edin. Ardından, MEA plakalarınızdan birinin kapağını cımbızı yandan kaydırmaya yetecek kadar kaldırın ve gövde çekirdeğini plakanın ortasına yerleştirmek için sterilize edilmiş cımbızı kullanın. Plakayı parafilm ile kapatın ve önümüzdeki birkaç hafta içinde plakayı kolonize eden S. Commune miselyumu görmelisiniz.

Yabani örneklerle çalışırken genellikle birkaç tabak yaparım, böylece kontaminasyon olursa en az bir temiz kültüre sahip olma olasılığım artar.